Millipore货号17-10489现货ChIPAb+雄激素受体-ChIP经验证的抗体和引物组13611631389上海睿安生物
说明
一般描述
对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物(通过qPCR对每个批次进行检测),以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+ 雄激素受体组包括雄激素受体抗体,正常兔IgG和扩增人前列腺特异性抗原(PSA)增强子区域的85bp区域的对照引物。雄激素受体抗体和阴性对照以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供,可用于功能性验证雄激素受体相关染色质的沉淀。
雄激素受体(AR)是一种核受体,通过与雄激素睾酮或二氢睾酮结合而被激活。雄激素受体的主要功能是作为调节基因表达的DNA结合转录因子。然而,雄激素受体还具有独立于DNA结合的其他功能。雄激素受体与孕激素受体关系最为密切,较高剂量的孕激素可阻断雄激素受体。
特异性:可识别雄激素受体。与雌激素、孕激素或糖皮质激素受体无交叉反应。
免疫原:人雌激素受体1-21位氨基酸对应的肽(MEVQLGLGRVYPRPPSKTYRG)。
应用
染色质免疫沉淀:
将LNCaP细胞激素饥饿72小时,然后用1 µM CI-4AS-1诱导过夜。 使用1 µg正常兔IgG(产品编号PP64B)或1 µg抗雄激素受体(产品编号CS207339)和Magna ChIP HiSens(目录编号17-10460),对每个IP~1e5细胞当量进行ChIP。 使用ChIP引物,PSA(产品编号CS207379)作为阳性基因座,并使用GAPDH启动子(产品编号22-004)作为阴性基因座,通过qPCR验证了雄激素受体相关DNA片段的成功免疫沉淀。 数据表示为每个IP样品相对于每个扩增子和ChIP样品的输入染色质的输入百分比。
请参阅Magna ChIP HiSens(目录号17-10460)或EZ-MagnaChIP HiSens(目录号17-10461)方案以获取实验详细信息。
染色质免疫沉淀:
将LNCaP细胞激素饥饿72小时,然后用载体(未处理)或1µM CI-4AS-1(处理)诱导过夜。 使用3µg正常兔IgG(产品编号PP64B)或3µg抗雄激素受体(产品编号CS207339)和Magna ChIP HiSens(目录编号17-10460),对每个IP~1e5细胞当量进行ChIP。 使用ChIP引物,PSA(产品编号CS207340)通过qPCR验证了雄激素受体相关DNA片段的成功免疫沉淀,阴性基因座是HNRP2AB1引物组。 报告了报告阳性基因座比阴性基因座富集倍数的Delta Delta Ct计算。
请参阅MagnaChIP HiSens(目录号17-10460)或EZ-MagnaChIP HiSens(目录号17-10461)方案以获取实验详细信息。
蛋白质印迹分析:该抗体的1:200-1:500稀释液在20μg人LNCaP细胞的RIPA裂解液中检测到雄激素受体。
免疫沉淀:代表性批次从500μg LNCaP RIPA细胞裂解液中免疫沉淀雄激素受体。
免疫细胞化学:代表性批次的1:50稀释液在用2%甲醛/5%乙酸固定并用0.1%Triton X-100透化的LNCaP细胞中显示出雄激素受体的阳性免疫染色。
ChIPAb+ &雄激素受体组包括&雄激素受体抗体、正常兔IgG & 扩增人前列腺特异性抗原(PSA)增强子区域的85bp区域的对照引物。
研究子类别
转录因子
研究类别
表观遗传学&核功能
包装:每组25次测定。推荐用于:每个染色质免疫沉淀约1µg抗体(取决于生物学背景)。
质量
染色质免疫沉淀:
使用1µg正常兔IgG(产品编号PP64B)或1 µg抗雄激素受体(产品编号CS207339)和Magna ChIP
® HiSens试剂盒(目录编号17-10460),对用激素饥饿(72H)制备超声染色质,然后诱导(1 µM CI-4AS-1)过夜LNCaP细胞(每个IP约1e5细胞当量)进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物,PSA(产品编号CS207340)通过qPCR验证了雄激素受体相关DNA片段的成功免疫沉淀。
有关实验详细信息,请参阅MagnaChIP HiSens(目录号17-10460)或EZ-MagnaChIP HiSens(目录号17-10461)方案。
外形
免疫亲和纯化
抗雄激素受体(兔多克隆),产品编号CS207339。 一个小瓶,含有125 µL(0.2 µg/ µL)纯化的兔多克隆,溶于含有0.1 M Tris-甘氨酸(pH 7.4)、150 mM NaCl和0.05%叠[dié][dàn]化钠,然后添加30%甘油的缓冲液中。 储存于-20°C。
正常兔IgG,产品编号PP64B。一个小瓶,包含125 µg(1.0 µg/ µL)兔IgG,溶于125 µL含有0.05%叠[dié][dàn]化钠的储存缓冲液中。 储存于-20°C。
ChIP引物,PSA。产品编号CS207340。一个小瓶,包含75 μL 5 μM每种对人前列腺特异性抗原增强子区域特异的引物。(chr19:51354179+51354263, hg19 build)储存于-20°C。
用于: 5’ GCC TGG ATC TGA GAG AGA TAT CAT C 3’
REV: 5’ ACA CCT TTT TTT TTC TGG ATT GTT G 3’
储存及稳定性:自收到之日起在-20°C可稳定保存1年。处理建议:第一次融化后,在取下瓶盖之前,将小瓶离心并轻轻混合溶液。分装到微量离心管中,并储存于-20°C。避免反复冻融循环,以免损坏IgG和影响产品性能。
分析说明(对照):包括正常兔IgG和前列腺特异性抗原(PSA)增强子区域特异性引物。
PBMC/人外周血单个核细胞/PBMC细胞/人外周血单个核细胞/冻存PBMC/hPBMC单个核细胞13611631389上海雅裕生物&上海睿安生物
新鲜和冷冻保存的人外周血单个核细胞(Human Peripheral Blood Mononuclear Cells)是外周血中具有单个核的细胞的混合群体,是免疫细胞的丰富来源,可以进一步纯化分离单个细胞类型,如天然杀伤细胞(Natural Kller Cell,NK),T淋巴细胞,B淋巴细胞等。此外,其中的单核细胞(monocyte)与各种细胞因子一起培养,可定向分化为巨噬细胞或树突状细胞等。
产品优势:
1、稳定高质量的健康人群细胞来源,全部细胞经HBV、HCV、HIV和TP血清学和核酸检测阴性;
2、给予全方位的技术支持(从冷冻细胞复苏到常规实验的-些建议;
3、可提供伦理证明和COA(细胞数量、存活率、B细胞和T细胞比值信息);
4、可提供新鲜细胞,货期一周;冷冻PBMC细胞:库存充足;
5、保证新鲜细胞活性>90%,,冷冻产品复苏后活性>90%。
定制化服务:
1.可根据客户实际实验需要提供小规格产品(1 million)进行测试,测试期间可预留相同Donor其它规格产品;
2.可根据客户实验需求提供某一亚型细胞含量高的产品(如CD56+, CD4+, CD8+, CD3+, CD14+等);
3.可根据客户实际实验需求筛选制定指标的Donor。
PBMC人外周血单核细胞培养前的准备:
在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台,这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。
细胞培养的定期检查:
定期检查培养细胞的形态,即形状和外观,对于细胞培养实验取得成功至关重要。除确认细胞的健康状态外,每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象,避免污染扩散至实验室其他细胞。
培养瓶/皿等物品的无菌操作:
无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子,不得将其开放暴露于环境中,操作完成后尽快盖上盖子,取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。
PBMC人外周血单核细胞培养中可能的污染物:
细胞培养污染物主要分为两类:化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。生物污染物,如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度。
细胞换液注意事项:
为细胞换液时,要沿着培养瓶的一侧轻轻地加入,而不是直接加到细胞中,以免损伤细胞,当培养的细胞株较为脆弱时尤其需要注意。使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体时,每支吸管只能使用一次,以免交叉污染。
细胞传代的时间把握:
当细胞呈指数增殖,贴壁培养的细胞已占据所有可用基质、没有扩增空间,或悬浮培养的细胞已超过培养基质所支撑的能力,无法进一步生长时,细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止。为了将细胞密度维持在最佳水平,以便细胞继续生长,并且刺激进一步增殖,必须对细胞进行传代。
细胞培养中使用抗生素的注意事项:
细胞培养时不应长期使用抗生素,因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生,导致轻度污染持续存在。抗生素只能作为对付污染的最后手段短期使用,并尽快撤除。如果长期使用抗生素,则应同时进行无抗生素培养,以便作为鉴别隐性感染的对照。
PBMC人外周血单核细胞培养方法:
一、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:取出25cm²培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5% CO₂细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
二、细胞传代:
(1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm²培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
(2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1m至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm高心5min;
(3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5% CO₂细胞培养箱中培养;
(4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
三、细胞冻存:
(1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm²培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
(2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm高心5min;
(3)用适量的冻存液(FBS:DMS0=9:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
(4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
四、细胞复苏:
(1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
(2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
(3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm²培养瓶,于37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养;
(4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
一、╳※试剂※╳PBMC分离服务:PBMC/人外周血单个核细胞/PBMC细胞/人外周血单个核细胞/冻存PBMC/hPBMC单个核细胞
二、╳※试剂※╳:
常规血清优势供应:Access货号51HI血清、Gemini货号900-108血清、Gemini血清、Gibco血清(10099-141澳洲血清、10270-106南美血清、16000-044血清)、BI血清BI货号04-001-1ACS、Sigma货号F8318-500ml澳洲胎牛血清、Sigma货号F8687澳洲胎牛血清、Sigma货号F0193南美胎牛血清[(乌拉圭)胎牛血清]、Sigma货号F2442-500ml特级胎牛血清、ScienCell货号0500澳洲胎牛血清、Cegrogen货号A0500-3010胎牛血清、Cegrogen货号B0500-5010新生牛血清、康源血清
培养基(包括无血清)、冻存液(包括无血清),包括:友康Yocon
Merck(Millipore/Sigma/Roche/KaPa/Supelco/Avanti/Corning/Brand)正式授权代理、博奥龙Biodragon独dú家总代理、EFL独dú家总代理、碧云天Beyotime代理、Proteintech、Active Motif正式授权代理
☆☆☆☆☆☆Beckman货号A63881纯化磁珠Agencourt AMPure XP(60ml/瓶)/A63882(450ml/瓶);Beckman货号B23317核酸片段筛选试剂盒Agencourt SPRIselect(5ml/瓶)
分子类:Biotium货号41003的GelRed染料、货号31000的EvaGreen染料、Zymo Research、Qiagen
饲料类:Research Diets、Dyets
三、╳※耗材※╳:
洁特JET耗材(各类常规用实验耗材)、赛普Cellpro耗材/KirGen耗材、博麦迪(常规的)各类试剂瓶
Bioplastics
Thermo Fisher Scientific的很多产品线,包括旗下的:
一、Nunc耗材
二、QSP耗材(各类吸头/滤芯吸头、离心管、PCR管等)
三、Nalgene耗材仪器
四、FisherBrand耗材仪器(含各类盖玻片载玻片等)
五、LabServ耗材仪器
六、Finnpipette移液器(如:F1系列、F2系列、F3系列等等各类型号的移液器)
七、Abgene耗材
畅销款:我们是常备有大量现货的
可请随时咨询:万奎13611631389(可以请加微信),邮箱:13611631389@163.com、wankui@rainbio.com.cn
※╳√√✓✔√✓✔√✓✔上海睿安生物科技有限公司成立于2009年,专注于为生命科学和生物技术领域的客户提供优质的产品与服务。代理了多家欧美知名品牌,如美国Thermo Fisher耗材(包括旗下Nunc、QSP、Nalgene、FisherBrand、LabServ耗材仪器、Finnpipette移液器、Abgene耗材,等等)、默克Merck-Millipore/Sigma/Roche/KaPa/Supelco/Avanti/Corning/Brand)、Zymo Research、洁特JET耗材(各类常规用实验耗材)、赛普Cellpro耗材、博奥龙Biodragon独dú家总代理、EFL独dú家总代理、碧云天Beyotime代理、Eppendorf、友康Yocon、Research Diets高脂饲料,IBL、BioVendor、Mercodia、ShiBayaji代谢类产品、Axygen-Corning长期大量耗材备货、BioCoat畅销款长期备货,Access货号51HI血清、Gemini血清、Gibco血清,BI血清现货、ScienCell血清、Sigma血清、Moregate血清、Cegrogen血清、Pierce发光试剂、Fermentas、Invitrogen、Proteintech、Active Motif、Abcam、CST、BD、SAB、R&D systems、Beckman、Qiagen、BD Pharmingen、Biolegend、Jackson、Miltenyi、MP Biomedicals、Biotium更好的荧光试剂产品等品牌。睿安生物始终将“提供更好的产品和服务”作为企业发展的目标和努力的方向,并将通过优质的售前与售后服务,始终如一地为客户提供高质量的产品和服务,我们也希望能得到相关领域中更多老师和同仁们的指导和鞭策,为共创优秀品牌而努力奋斗!询订╳直线13611631389微信号